TOKYO BOEKI - официальный дистрибьютор Nikon на территории России и в других странах СНГ
ОПТИЧЕСКИЕ МИКРОСКОПЫ И СИСТЕМЫ ИЗМЕРЕНИЯ
Телефон:
+7-495-223-4000
E-mail:
main@tokyo-boeki-ea.com

Мультифотонный конфокальный микроскоп Nikon A1 MP+, A1R MP+

Свяжитесь со специалистом удобным для Вас способом:
(495) 223-40-00 | systems@tokyo-boeki.ru
Мультифотонный конфокальный лазерный микроскоп А1MP+ компании Nikon позволяет визуализировать сверхглубокую динамику в живых организмах со скоростью до 420 кадров в секунду. Возможно использование инфракрасного лазера 1300 нм и нового детектора NDD, не требующего десканирования, на базе GaAsP с возможностью получения изображений на глубине свыше 1,4 мм

Лазерные конфокальные микроскопы A1MP+/A1R MP+ обеспечивают быстрое и четкое получение изображений глубоких слоев ткани живых организмов, расширяя тем самым границы традиционных исследовательских методов применяемых в биологии.

Скорость получения изображений до 420 кадров/сек (512х32 пикселей) вместе с мультифотонным формированием изображений с использованием высокоэффективной оптики и резонансного сканера A1R MP+.

Получение изображений глубоких слоев ткани образца при помощи детекторов NDD, размещенных рядом с задней апертурой объектива.
Сверхчувствительные арсенид-фосфид галлиевые (GaAsP) NDD-детекторы позволяют получить изображений мозга мыши in vivo на глубине свыше 1,4 мм.

Функция автоматической юстировки лазера предусматривает быструю корректировку смещения инфракрасного лазерного луча после изменения длины волны многофотонного возбуждения.

Инфракрасный лазер подключается к микроскопу при помощи компактного оптического блока, содержащего акустооптический модулятор и выполняющего функции автоматической юстировкой лазера.

Совместимость с прямым и инвертированным микроскопами.

Обеспечивает получение оптимальных мультифотонных изображений при исследованиях мозга, других нейробиологических применений и получение in vivo изображений живых организмов.

Качество изображения

Эффективность флуоресценции увеличена на 30%, также увеличено отношение сигнал/шум.

В серии микроскопов А1 MP+ технология малого угла падения лучей применена впервые на дихроичных зеркалах, благодаря чему увеличен уровень флуоресценции на 30 %.

Стандартный метод с 45° углом падения

Характеристики отражения-пропускания
лучей сильно зависят от поляризации
Метод малого угла падения

Характеристики отражения-пропускания
лучей имеют меньшую зависимость от поляризации

Вместо квадратного точечного отверстия с плавным изменением размера впервые используется точечная диафрагма шестигранной формы. Благодаря этому при сохранении конфокальности достигается более высокая яркость, почти эквивалентная идеально круглому точечному отверстию (на 30%больше света!).


64 % площади круга / 83 % площади круга

Для увеличения эффективности и предотвращения потери сигнала при обработке пиксельных данных системой оцифровки сигнала и при сбросе, в схеме процесса обработки изображений была реализована оригинальная разработка компании Nikon – технология двойной интегрированной обработки сигнала (DISP). Сигнал отслеживается в течение всего времени приема информации с пикселя, благодаря чему достигается чрезвычайно высокое соотношение сигнал/шум. Два интегратора работают параллельно во время считывания оптической информации, что позволяет избежать пропусков.


Принцип мультифотонного возбуждения

Когда одна флуоресцентная молекула поглощает одновременно два фотона (двухфотонное возбуждение), эффективность возбуждения пропорциональна квадрату интенсивности возбуждающего излучения.
Чтобы добиться мультифотонного возбуждения, используется импульсное излучение с высокой плотностью фотонов или интенсивности. Так как лазерное излучение представляет собой очень короткие (фемтосекунды) импульсы и достигает фокальной точки после прохождения через объектив, вероятность одновременного поглощения двух фотонов становится достаточно высокой.
В случае двухфотонного возбуждения эффективность возбуждения снижается обратно пропорционально четвертой степени расстояния от фокальной плоскости. В результате только флуоресцентные молекулы расположенные в пределах объема ограниченного дифракционным пределом объектива возбуждаются и могут флуоресцировать. Этот принцип позволяет использовать NDD детекторы где для достижения конфокальных результатов не требуется точечная диафрагма.
При прохождении через образец инфракрасное излучение поглощается и рассеивается меньше, чем видимые длины волн, поэтому возбуждающее излучение может легче проникать в глубокие слои ткани.
Так как двухфотонное возбуждение сильно ограничено дифракционным пределом фокального объема, исключается необходимость использования конфокальной точечной диафрагмы для устранения попадания флуоресцентного излучения из плоскостей вне фокуса на детектор. Таким образом, обеспечивается минимизация фотоповреждений образцов и создаются условия для регистрации флуоресцентного излучения от живых образцов. При использовании NDD детектора и системы предварительной компенсации дисперсии групповых скоростей, встроенной в мультифотонный лазер, можно получать флуоресцентные изображения более глубоких слоев ткани образцов, используя стандартный конфокальный метод.

Фемтосекундные импульсные лазеры

Когда импульсное излучение, длительностью около 100 фемтосекунд, проходит через оптику микроскопа (например, объектив), длительность импульса увеличивается из-за дисперсии групповых скоростей (изменение скорости при прохождении через стеклянную подложку), вызывая снижение пиковой мощности.
Чтобы предотвратить снижение пиковой мощности импульса, в фемтосекундных импульсных лазерах для мультифотонной микроскопии компании Nikon предусмотрены механизмы предварительной компенсации дисперсии групповых скоростей, которые восстанавливают исходную длительность импульса в образце. Механизмы предварительной компенсации были оптимизированы для оптической системы Nikon. Это позволяет получать яркие флуоресцентные изображения глубоких слоев ткани образцов при минимальной мощности лазера.

Программное обеспечение NIS-Elements C

Обычные операции, выполняемые конфокальными микроскопами Nikon
  • Все необходимые операции по регистрации изображений отображаются в одном окне.
  • Лазеры и детекторы, регистрирующие флуоресценцию от возбуждения лазером видимого диапазона, легко переключаются путем выбора флуоресцентного зонда.
  • Переключение между высокоскоростным резонансным сканером и гальвано-сканером (не резонансным) для высокого разрешениея осуществляется одним нажатием кнопки.
  • Предусмотрена одновременная фотоактивация и высокоскоростное получение изображений при помощи возбуждения лазером видимого диапазона.
Функции для получения мультифотонных изображений высокого качества
  • Функция автоматической юстировки лазера
    В случае изменения длины волны возбуждения юстировка ИК лазера осуществляется одним нажатием кнопки.
  • Функция контроля интенсивности Z
    Пользователи могут выбрать мощность лазера и коэффициент усиления ФЭУ при получении Z-стэков при помощи функции контроля интенсивности Z. Таким образом, даже при формировании изображений плотных и толстых образцов, интенсивность излучения будет оставаться постоянной.
  • Функция разделения каналов
    Функция разделения каналов компании Nikon позволяет регистрировать излучение одновременно от нескольких фотоумножителей NDD детекторов, использую одну длину волны возбуждения ИК лазера NDD и разделять перекрывающиеся спектры, предотвращать наложение спектров.
  • Функция запуска
    Микроскоп A1 MP+/A1R MP+ и программное обеспечение NIS Elements C поддерживают запуск приложений предназначенных для синхронизации интервала и времени сканирования с регистрацией электрофизиологических данных, а также для внешнего запуска сканирования.
Объективы Nikon с высокой числовой апертурой идеально подходят для получения мультифотонных изображений

Объективы с высокой числовой апертурой были разработаны для коррекции хроматической аберрации во всем диапазоне длин волны от ультрафиолетового до инфракрасного. Светопропускание повышается благодаря использованию эксклюзивной технологии Nikon Nano Crystal Coat.
В частности, линзы погружного объектива CFI Апохромат 25xW MP обеспечивают высокую числовую апертуру равную 1,10, при этом сохраняя рабочее расстояние, равное 2,0 мм. Также предусмотрено кольцо, которое корректирует хроматическую аберрацию в зависимости от глубины образца. Конструкция объектива обеспечивает угол подвода пипетки манипулятора, равный 33°, делая его идеальным для получения мультифотонных изображений глубоких тканей и для применения в физиологических исследованиях.

Nano Crystal Coat – это эксклюзивная технология покрытия линз компании Nikon, в которой применяется несколько слоев наночастиц со сверхнизким показателем преломления, созданная при разработке промышленного оборудования производящего полупроводники. Структура покрытия Nano Crystal Coat значительно снижает отражение от внешней поверхности линзы и увеличивает пропускание во всем диапазоне.

Объективы:

CFI75 Apochromat 25xW MP NA 1.10, WD 2.00 мм
CFI Apochromat 40xWI λS NA 1.25, W.D. 0.18 мм
CFI Apochromat LWD 40xWI λS NA 1.15, W.D. 0.60 мм
CFI Plan Apochromat IR 60xWI NA 1.27, W.D. 0.17 мм

Автоматическая юстировка лазера при изменении длины волны при мультифотонном возбуждении

При изменении длины волны лазера или предварительной компенсации дисперсии групповой скорости положение лазерного луча на задней апертуре объектива может также изменяться, что приводит к неравномерной яркости изображений или к небольшому несовпадению путей инфракрасного и видимого лазерного излучения.
Юстировка лазерного луча обычно является сложной задачей. Благодаря функции автоматической юстировки лазера в A1 MP+ компании Nikon, предусмотренной в оптическом блоке для мультифотонного возбуждения, юстировка ИК лазера выполняется автоматически одним нажатием кнопки в NIS Elements C.

Сканирующая головка A1+/A1R+ высокого разрешения

A1 MP+ оборудован гальвано- (нерезонансным) сканером для получения изображений высокого разрешения.

Гальванический (нерезонансный) сканер A1 MP+ обеспечивает получение изображений с высоким разрешением (до 4096 х 4096 пикселей). Помимо этого, благодаря новейшим системам привода сканера и отбора образцов, а также уникальной технологии коррекции изображений Nikon, также возможно высокоскоростное получение изображений со скоростью 10 к/с (512 х 512 пикселей).

1D сканирование: 5200 строк в секунду
2D сканирование: 130 к/с (512 х 32 пикселя)
Полнокадровое сканирование: 10 к/с (512 х 512 пикселей)

Получение многоцветных изображений

Стандартный четырехканальный детектор избавляет от необходимости приобретения дополнительного флуоресцентного детектора и позволяет с легкостью получать изображения образца, помеченного четырьмя зондами.

Серия Z-проекций XYZ изображений клетки LLC-PK1, экспреcсирующей EGFP-альфа-тубулин (зеленый) и Histone H2B-mCherry (красный). Изображение фиксировалось каждые 2 минуты с помощью гальванического сканера.


0 мин / 4 мин / 6 мин / 8 мин / 12 мин
Фото-конверсия флуоресцентного белка Kaede

Белок Kaede необратимо изменяет цвет флуоресценции с зеленого на красный из-за спектральной конверсии при воздействии на него излучения от ультрафиолетовой до фиолетовой области спектра.

В момент фиксации изображения клетки HeLa, экспрессирующей Kaede с зеленой и красной флуоресценцией, при помощи лазеров с длиной волны 488 нм и 561 нм, в качестве возбуждающих, для фото-конверсии белок Kaede в изучаемой области непрерывно активировался лазером с длиной волны 405 нм. На фотографиях представлена дисперсия красной флуоресценции Kaede, вызываемой фото-конверсией.

Длина волны активирующего лазера: 405 нм, длина волны лазера, фиксирующего изображение: 488 нм / 561 нм, размер изображения 512 х 512 пикселей, скорость захвата 1 к/с (при помощи гальванического сканера).

Фотоконверсия белков Phamret (Резонансный перенос энергии за счет фотоактивации)

Фотоактивируемый белок Phamret - это гибридный белок состоящий из двух частей: белка CFP и белка PA-GFP. Когда белок PA-GFP активируются при помощи фиолетово-ультрафиолетового излучения, его светло-голубая флуоресценция в результате межмолекулярного резонансного переноса энергии от CFP к PA-GFP изменяется на зеленую.

Во время получения изображения клеток HeLa, экспрессирующих Phamret посредством голубой и зеленой флуоресценции, при помощи лазера с длиной волны 457 нм, часть PA-GFP в изучаемой области непрерывно возбуждается лазером с длиной волны 405 нм. Активированная часть, наблюдаемая в области голубой флуоресценции (показана на изображении оттенками серого) испускает зеленую флуоресценцию (на изображениях показана красным). Реакция, на которую указывает зеленое свечение, является реакцией дисперсии Phamret (на изображениях она показана красным).

A1 MP+
Порт ввода-вывода 2 лазерных порта ввода
3 порта ввода лазерного излучения
4 порта вывода сигнала для 4-х канального PMT-детектора, спектрального детектора, системы VAAS (дополнительной) и детектора стороннего производителя (FCS/FCCS/FLIM)
Лазер для мультифотонной микроскопии Совместимый лазер Mai Tai HP/eHP DeepSee (Newport Corp.)
Chameleon Vision II (Coherent Inc.)
Модуляция метод: AOTF (акустооптический настраиваемый фильтр) или AOM (акустооптический модулятор) Метод: Акустооптический модулятор
Управление: регулирование мощности, обратная маска, установка экспозиции в изучаемой области
Оптика для падающего излучения 700-1080 нм, автоматическая юстировка
Лазер для конфокальной микроскопии (опция) Совместимый лазер 405 нм, 440/445 нм, 488 нм, 561/594 нм, 638/640 нм, аргоновый лазер (457 нм, 488 нм, 514 нм), гелий-неоновый лазер (543 нм)
Модуляция метод: AOTF (акустооптический настраиваемый фильтр) или AOM (акустооптический модулятор)
управление: контроль мощности каждой длины волны, контроль экспозиции изучаемой области
Лазерный блок стандартный: LU4A 4-лазерный блок A или C-LU3EX 3-лазерный блок EX
опциональный: C-LU3EX 3-лазерный блок EX (когда в качестве стандартного лазерного блока выбран 4-лазерный блок A)
LU-N4, LU-N4S, LU-N3, LU-NV
Детектор, не требующий десканирования, (NDD) для многофотонной микроскопии Длина волны 480-650 нм
Детектор 4 PMT (ФЭУ)
Куб флуоресцентных фильтров Рекомендуемые наборы фильтров для мультифотонной микроскопии: 492SP, 525/50, 575/25, 629/53, DM458, DM495, DM511, DM560, DM593
Тип детектора Эпископический NDD детектор (для Ni-E/FN1/Ti-E)
Диаскопический NDD детектор (для Ni-E)
Эпископический GaAsP NDD детектор (для FN1)
Стандартный детектор Флуоресценции (опция) Длина волны 400-750 нм (400-650 нм для мультифотонного наблюдения)
Детектор A1-DU4 4 PMT (ФЭУ)
A1-DUG 2 GaAsP + 2 PMT (ФЭУ)
Светофильтр 6 наборов светофильтров, крепятся в каждое из трех держателей для светофильтров рекомендованные длины волн: 450/50, 482/35, 515/30, 525/50, 540/30, 550/49, 585/65, 595/50, 700/75
Диаскопический детектор (опция) Длина волны 440-645 нм
Детектор PMT (ФЭУ)
Сканирующая головка Стандартный процесс получения изображения Сканер: гальванический сканер x2
Размер в пикселях: максимально 4096 x 4096 пикселей
Скорость сканирования:
Стандартный режим: 2 к/с (512 x 512 пикселей, в оба направления), 24 к/с (512 x 32 пикселя, в оба направления)
Быстрый режим: 10 к/с (512 x 512 пикселей, в оба направления), 130 к/с (512 x 32 пикселя, в оба направления)*1
Трансфокатор: 1-1000x бесступенчатый режим сканирования: X-Y, X-T, X-Z, XY вращение, в произвольном направлении
Диапазон ИК лазера 700-1000 нм
Дихроичное зеркало Метод малого угла падения лучей, позиций: 8
Стандартный фильтр: 405/488, 405/488/561, 405/488/561/638, 400-457/514/IR, 405/488/543/638, BS20/80, IR, 405/488/561/IR
Спектральный детектор (с гальваническим сканером) (опция) Количество каналов 32 канала
Диапазон улавливания волн 400-750 нм (400-650 нм для мультифотонного наблюдения)
Скорость получения спектрального изображения 4 к/с (256 x 256 пикселей), 1000 линий в секунду
Размер в пикселях: максимально 2048 x 2048 пикселей
Разрешение по длинам волн 80 нм (2,5 нм), 192 нм (6 нм), 320 нм (10 нм) диапазон длин волн меняется с шагом 0,25 нм
Разделение Высокоскоростное, точное разделение
Совместимые микроскопы Инвертированный микроскоп ECLIPSE Ti-E, микроскоп с неподвижным предметным столом ECLIPSE FN1, прямой микроскоп ECLIPSE Ni-E (с фокусирующей револьверной головкой или фокусирующим столом)
Дополнительная комплектация Система виртуальной адаптируемой диафрагмы VAAS
Программное обеспечение Воспроизведение/Формирование изображения 2D-анализ, объемное 3D-изображение, 4D-анализ, спектральное разделение
Области применения FRAP, FLIP, FRET (дополнительно), фотоактивация, получение трехмерных изображений во времени, получение многоточечных изображений во времени, колокализация
Рекомендуемые условия установки Температура от 20°С до 25°С ± 1°C, круглосуточное кондиционирование воздуха, относительная влажность воздуха 75% или меньше (без образования конденсата), темное помещение или защита микроскопа от света, виброизоляционный стол
Высокоскоростная сканирующая головка A1R+

Комбинированная сканирующая головка A1R MP+ снабжена и гальвано-сканером, и резонансным сканером со сверхвысокой резонансной частотой равной 7,8 кГц.

Гальванический (нерезонансный) сканер A1R MP+ обеспечивает получение изображений с высоким разрешением (до 4096 х 4096 пикселей).
Резонансный сканер обеспечивает получение изображений и фотоактивацию со скоростью 420 кадров/сек (512 х 32 пикселей), которая необходима для выявления клеточной динамики и взаимодействия.

1D Сканирование: 15 600 строк в секунду (с/с)
2D Сканирование: 420 к/с (512 х 32 пикселя)
Полнокадровое сканирование: 30 к/с (512 х 512 пикселей)

Оптический путь в сканирующей головке A1R+:

Резонансный сканер (зеленый оптический путь) используется для получения изображений с высокой скоростью до 420 к/с (с разрешением 512 х 512 пикселей). Во время одновременной фотоактивации и получения изображений резонансный сканер используется для регистрации изображений.

Гальванический сканер (синий оптический путь) используется для получения высококачественных изображений с высоким разрешением до 4096 х 4096 пикселей. Также возможно высокоскоростное получение изображений с частотой кадров до 10 к/с (с разрешением 512 х 512 пикселей). Во время одновременной фотоактивации и получения изображений гальванический сканер используется для фотостимуляции.

Гибридный сканер - это механизм, который позволяет гибко переключаться между двумя сканерами (резонансный и гальванический), либо использовать их одновременно с помощью высокоскоростного гипер-селектора.
Может быть введено излучение одновременно от 7 лазеров (максимум 9 длин волн).

Одновременная фотоактивация и получение изображений

Одновременные процессы фотоактивации и получения флуоресцентных изображений проводятся при помощи гальвано-сканера и резонансного сканера. Получение изображений быстрых биологических процессов после фотоактивации возможно благодаря тому, что резонансный сканер способен получать изображения со скоростью 30 кадров/сек.


Стабильное высокоскоростное получение изображений

Для высокоскоростного получения изображения с помощью резонансного сканера используется оригинальная методика определения положения сканирующего зеркала компании Nikon. Постоянные тактовые импульсы генерируются оптическим способом, что обеспечивает отсутствие как эффекта мерцания, так и искажений даже на самой высокой скорости сканирования.

Высокоскоростная передача данных с помощью волоконно-оптической системы.

Волоконно-оптическая система передачи данных может транслировать данные с максимальной скоростью 4 Гбит в секунду. Это позволяет передавать изображения (512 х 512 пикселей, 16 бит) в пяти режимах со скоростью 30 кадров в секунду.

Широкое поле обзора

Резонансные сканеры не страдают от перегрева мотора при высокоскоростном получении изображений. Таким образом, отсутствует необходимость в сокращении поля обзора сканированного изображения для предотвращения перегрева. Это обеспечивает большее поле обзора, чем у гальванического сканера.

A1R MP+
Порт ввода-вывода 3 порта ввода лазерного излучения
4 порта вывода сигнала для 4-х канального PMT-детектора, спектрального детектора, системы VAAS (дополнительной) и детектора стороннего производителя (FCS/FCCS/FLIM)
Лазер для мультифотонной микроскопии овместимый лазер Mai Tai HP/eHP DeepSee (Newport Corp.)
InSight DeepSee (Newport Corp.) 1300 нм *news
Chameleon Vision II (Coherent Inc.)
Модуляция метод: Акустооптический модулятор
управление: регулирование мощности, обратная маска, установка экспозиции в изучаемой области
Оптика для падающего излучения 700-1080 нм, 700-1300 нм, автоматическая юстировка
Лазер для конфокальной микроскопии (опция) овместимый лазер 405 нм, 440/445 нм, 488 нм, 561/594 нм, 638/640 нм, аргоновый лазер (457 нм, 488 нм, 514 нм), гелий-неоновый лазер (543 нм)
Модуляция метод: AOTF (акустооптический настраиваемый фильтр) или AOM (акустооптический модулятор)
управление: контроль мощности каждой длины волны, контроль экспозиции изучаемой области
Лазерный блок стандартный: LU4A 4-лазерный блок A или C-LU3EX 3-лазерный блок EX
опциональный: C-LU3EX 3-лазерный блок EX (когда в качестве стандартного лазерного блока выбран 4-лазерный блок A)
LU-N4, LU-N4S, LU-N3, LU-NV
Детектор, не требующий десканирования, (NDD) для многофотонной микроскопии Длина волны 380-650 нм, 380-750 нм (для 1300 нм)
Детектор A1-DU4 4 PMT (ФЭУ)
A1-DUG 2 GaAsP + 2 PMT (ФЭУ)
Куб флуоресцентных фильтров Рекомендуемые наборы фильтров для мультифотонной микроскопии: 492SP, 525/50, 575/25, 629/53, DM458, DM495, DM511, DM560, DM593 450/70, 550/80, 610/75, 641/75, 732/68, DM405, DM488/561
Тип детектора Эпископический NDD детектор (для Ni-E/FN1/Ti-E)
Диаскопический NDD детектор (для Ni-E)
Эпископический GaAsP NDD детектор (для FN1)
Эпископический GaAsP NDD детектор (для Ni-E/FN1) для 1300 нм
Стандартный детектор Флуоресценции (опция) Длина волны 400-750 нм (400-650 нм для мультифотонного наблюдения)
Детектор 4 PMT (ФЭУ)
ветофильтр 6 наборов светофильтров, крепятся в каждое из трех держателей для светофильтров рекомендованные длины волн: 450/50, 482/35, 515/30, 525/50, 540/30, 550/49, 585/65, 595/50, 700/75
Диаскопический детектор (опция) Длина волны 440-645 нм
Детектор PMT (ФЭУ)
Сканирующая головка тандартный процесс получения изображения Сканер: гальванический сканер x2
Размер в пикселях: максимально 4096 x 4096 пикселей
Скорость сканирования:
Стандартный режим: 2 к/с (512 x 512 пикселей, в оба направления), 24 к/с (512 x 32 пикселя, в оба направления)
Быстрый режим: 10 к/с (512 x 512 пикселей, в оба направления), 130 к/с (512 x 32 пикселя, в оба направления)*1
Трансфокатор: 1-1000x бесступенчатый режим сканирования: X-Y, X-T, X-Z, XY вращение, в произвольном направлении
Высокоскоростное получение изображений Сканер: резонансный сканер (X-ось, резонансная частота 7,8 кГц), гальванический сканер (Y-ось)
Размер в пикселях: максимально 512 x 512 пикселей
Скорость сканирования: от 30 к/с (512 x 512 пикселей) до 420 к/с (512 x 32 пикселей), 15 600 линий в секунду (линейная скорость)
Трансфокатор: 7-ступенчатый (1x, 1.5x, 2x, 3x, 4x, 6x, 8x)
Режим сканирования: X-Y, X-T, X-Z
Метод получения изображений: стандартное получение изображений, высокоскоростное получение изображений, параллельные фотоактивация и получение изображений
Диапазон ИК лазера 700-1080 нм, 700-1300 нм
Дихроичное зеркало Метод малого угла падения лучей, позиций: 8
Стандартный фильтр: 405/488, 405/488/561, 405/488/561/638, 400-457/514/IR, 405/488/543/638, BS20/80, IR, 405/488/561/IR
Точечная диафрагма изменение в пределах 12-256 мкм (плоскость 1 изображения)
Спектральный детектор (с гальваническим сканером) (опция) Количество каналов 32 канала
Диапазон улавливания волн 400-750 нм (400-650 нм для мультифотонного наблюдения)
корость получения спектрального изображения 4 к/с (256 x 256 пикселей), 1000 линий в секунду
Размер в пикселях: максимально 2048 x 2048 пикселей
Разрешение по длинам волн 80 нм (2,5 нм), 192 нм (6 нм), 320 нм (10 нм) диапазон длин волн меняется с шагом 0,25 нм
Разделение Высокоскоростное, точное разделение
Совместимые микроскопы Инвертированный микроскоп ECLIPSE Ti-E, микроскоп с неподвижным предметным столом ECLIPSE FN1, прямой микроскоп ECLIPSE Ni-E (с фокусирующей револьверной головкой или фокусирующим столом)
Дополнительная комплектация Система виртуальной адаптируемой диафрагмы VAAS
Программное обеспечение Воспроизведение Формирование изображения 2D-анализ, объемное 3D-изображение, 4D-анализ, спектральное разделение
Области применения FRAP, FLIP, FRET (дополнительно), фотоактивация, получение трехмерных изображений во времени, получение многоточечных изображений во времени, колокализация
Рекомендуемые условия установки Температура от 20°С до 25°С ± 1°C, круглосуточное кондиционирование воздуха, относительная влажность воздуха 75% или меньше (без образования конденсата), темное помещение или защита микроскопа от света, виброизоляционный стол

В случае мультифотонного возбуждения флуоресцентные излучения из глубоких тканей образца сильно рассеиваются, поэтому традиционный детектор, использующий точечную диафрагму, не может обеспечить получение ярких флуоресцентных изображений. Эпископический NDD детектор в A1 MP+/A1R MP+ расположен близко к задней апертуре объектива, что обеспечивает более эффективную регистрацию рассеянного сигнала от глубоких слоев тканей живых организмов. Использование этого четырехканального детектора в сочетании со специальными спектральными зеркалами и алгоритмом спектрального разделения компании Nikon исключает наложение спектров флуоресцентных зондов. При этом исключается фоновая автофлуоресценция, что обеспечивает получение высококонтрастного изображения глубоких слоев образца. При использовании диаскопического NDD детектора вместе с эпископическим NDD детектором можно получить более яркие изображения, благодаря регистрации как отраженных, так и прямых флуоресцентных сигналов.

Изображения глубоких зон коры головного мозга живых мышей

Кора головного мозга линии Н мыши в возрасте 5 недель была изучена методом открытого черепа. Вся форма дендрита пирамидальной клетки в слое V экспрессирующая EYEP была визуализирована от нижнего до поверхностного слоя. Кроме того, был также изучен флуоресцентный сигнал от белого вещества в более глубоких зонах.

Слева направо:
1. Дендриты, расположенные в поверхностных слоях пирамидальных клеток слоя V на глубине 25 мкм
2. Базальные дендриты в пирамидальных клетках слоя V на глубине 625 мкм
3. Флуоресцентное излучение от белого вещества

Длина волны возбуждения: 930 нм
Объектив: CFI75 Апохромат 25хW MP (числовая апертура -1,10, рабочее расстояние - 2,0)

Получение многоцветных изображений коры головного мозга мыши

Одновременное получение по трем каналам изображений коры головного мозга мыши при анестезии с использованием YFP-H при ИК излучением с длиной волны 950 нм и получение изображений генерации второй гармоники (SHG) и двух флуоресцентных излучений.

Голубой: SHG сигнал от твердой оболочки мозга
Желтый: EYFP пирамидальные нейроны в слое V коры головного мозга
Красный: Кровеносные сосуды меченные SRB

Разделение каналов

При мультифотонном возбуждении флуорофоры имеют значительно более широкий профиль спектра поглощения по сравнению с однофотонным возбуждением. Поэтому возможно одновременное возбуждение нескольких флуорофоров при помощи одной длины волны возбуждения.

Кроме того, можно изменять длину волны импульсного лазера для мультифотонного возбуждения и пользователь может выбрать подходящую длину волны для возбуждения нескольких флуорофоров.

Детектор A1 MP+/A1R MP+ NDD и технология разделения каналов позволяют пользователю четко разграничивать флуорофоры и получать информацию о структуре глубоких слоев живого образца.

Разделение при одновременном возбуждении трех флуорофоров

Одновременное получение трехцветных изображений мыши под анестезией при помощи YFP-H при возбуждении ИК излучением с длиной волны 950 нм.
Изображение получено при помощи функции разделения. Видно, что кровеносные сосуды и нейроны четко разделены.

Разделение при одновременном возбуждении двух флуорофоров

Зачаток спинного мозга (нервная трубка) эмбриона крысы в возрасте 12,5 дней.
Эмбрион выращивали приблизительно 44 часа после трансфекции левых и правых нервных клеток eGFP и YFP путем электропорации.
Поперечный срез спинного мозга был помещен в гель и одновременное возбуждение eGFP и YFP при помощи импульсного ИК лазера (930 нм).
Изображение получено при помощи NDD детектора и была применена функция разделения.
Было получено четкое изображение промежуточного нейрона и комиссурального аксона.

Новый GaAsP NDD детектор позволяет получать in vivo четкие изображения более глубоких слоев ткани образцов чем прежде и представляет собой достаточно мощное устройство для анализа, например, нейронов мозга живых организмов.

Чувствительность недавно разработанного GaAsP NDD детектора почти в 2 раза превосходит чувствительность стандартного NDD детектора. Это обеспечивает более быстрое формирование изображений и формирование более качественных изображений из Z-стэков. Высокая чувствительность детектора обеспечивает получение флуоресцентных сигналов при меньшей мощности лазера, что позволяет уменьшить наносимый живым клеткам вред.

Получение изображений глубинных структур мозга живой мыши.

Получение изображений мозга живой мыши (в возрасте 4 недели) под анестезией с использованием YFP-H методом открытого черепа.
Визуализация всех пирамидальных нейронов слоя V и более глубоких гиппокампальных нейронов. Глубокое изображение достигается для 3-ех мерного изображения гиппокампальных дендритов расположенных на глубине более 1,1 мм.

Также доступна модель NDD детектора на GaAsP для использования с лазером 1300 нм для получения изображений на глубине до 1,4 мм.

Быстрое получение мультифотонных изображений in vivo.

Резонансный сканер Nikon способен получать изображения на достаточно высокой скорости (420 кадров/сек) и является самым быстрым мультифотонным микроскопом в мире, использующим технологию точечного сканирования. Уникальным элементом в этом устройстве является зеркало резонансного сканера, способное регистрировать изображения на значительно более высокой скорости по сравнению с традиционными гальванометрическими сканерами. Оптическая система контроля положение резонансного зеркала в режиме реального времени регулирует частоту пикселизации и позволяет получать более стабильные, геометрически правильные и равномерно освещенные изображения даже на высоких скоростях. Это обеспечивает успешную визуализацию быстрых изменений в живых организмах, например, реакции живых организмов, динамику и взаимодействия клеток.

Визуализация процессов микроциркуляции в живых образцах

Клетки крови в кровеносных сосудах живого организма были возбуждены фемтосекундным импульсным ИК лазером со сверхскоростным резонансным сканером A1R MP+. Их перемещения были зарегистрированы в форме трех последовательных флуоресцентных изображений на скорости 30 кадров/сек (30 мсек) в трех отдельных цветовых каналах.
Были возбуждены и зарегистрированы три флуоресцентных зонда – ядро (синий), эндотелий (зеленый) и плазма (красный). Длинноволновый сверхбыстрый лазер в сочетании со сверхскоростным резонансным сканером эффективно снижает фотоповреждение и предоставляет возможность получения мультифотонных изображений биомолекул с временным разрешением.

Скоростное получение изображений мозга живой мыши

Кора головного мозга мыши (возраст 4 недели) была изучена методом открытого черепа под анестезией с использованием YFP-H. В хвостовую вену был введен SRB (сульфородамин-В). Используя резонансное сканирование при помощи эпископического детектора GaAsP NDD можно получить изображения тока крови в различных положениях Z.
Желтый: пирамидальные клетки EYFP в слое V коры головного мозга

Конфокальный микроскоп A1 MP+ компании Nikon позволяет получать спектральные изображения на высоких скоростях за одно сканирование. Кроме того, предусмотрены расширенные функции, включая спектральное разделение в режиме реального времени.

Разрешение по длинам волн может изменяться с помощью трех разных дифракционных решеток (2,5/6/10 нм). Каждое положение точно контролируется для достижения максимальной воспроизводимости длины волны.

Используется точно скорректированный 32-х канальный линейный детектор. Подвижный механизм тройного экранирования позволяет использовать до четырех лазеров одновременно.

Система увеличения эффективности дифракции (DEES)

При помощи системы DEES, неполяризованный флуоресцентный свет, излучаемый образцом, разделяется при помощи делителя поляризованных лучей на два поляризованных световых луча P и S. Затем, луч с P-поляризацией преобразуется при помощи устройства поворота плоскости поляризации в S-поляризованный луч, так как S луч обладает большей эффективностью дифракции, чем Р и достигается значительное увеличение общей эффективности.

Технология высокоэффективного пропускания флуоресценции

Концы флуоресцентных световодов и поверхности детектора покрыты специальным противоотражающим покрытием, чтобы свести все потери сигнала к минимуму, чем достигается высокая степень оптического пропускания.

Точная спектральная информация: три метода коррекции

Три метода коррекции позволяют получить точный спектр: межканальная коррекция чувствительности, которая регулирует смещение и чувствительность каждого канала; коррекция спектральной чувствительности, которая регулирует спектральную эффективность дифракционной решетки и эффективность спектрального детектора; коррекция спектрального пропускания в оптических элементах сканирующих головок и микроскопов.

Наверх